Wymiana izotopowa wodór-deuter jako metoda otrzymywania standardów znakowanych izotopowo związków chemicznych do analizy ilościowej metodą LC-MS

Możliwość zastosowania tak otrzymanego standardu znakowanego izotopowo w analizie ilościowej Bitrexu została potwierdzona z udziałem analizy skażonego Bitrexem rozcieńczalnika spirytusowego czy płynów do spryskiwaczy samochodowych.

Otrzymywanie standardu znakowanego izotopowo kreatyniny

Opracowaliśmy także metodę otrzymywania deuterowanego standardu kreatyniny i jego zastosowania w analizie ilościowej tego metabolitu w próbkach moczu metodą LC-MS [15]. Kreatynina jako produkt rozpadu fosforanu kreatyny w mięśniach jest zwykle wytwarzana przez organizm w stosunkowo stałej ilości. Wzrost jej poziomu we krwi obserwuje się tylko przy wyraźnym uszkodzeniu funkcjonujących nefronów, dlatego jej pomiar jest uznawany za najczęściej stosowany marker czynności nerek. W ilościowym oznaczaniu kreatyniny coraz powszechniej stosuje się metodę LC-MS, której ograniczeniem jest jednak wysoka cena dostępnych handlowo standardów znakowanych izotopowo, niezbędnych w tej technice. Wykorzystaliśmy opracowaną wcześniej metodę reakcji wymiany izotopowej H/D (1% TEA w D₂O, 1 godzina, temperatura pokojowa). Rezultaty przedstawia ryc. 4.

Ryc. 4. A) Schematyczne przedstawienie reakcji HDX przebiegającej na atomie węgla α we fragmencie N-metyloaminokwasu cząsteczki kreatyniny; B) fragment widma 1H NMR kreatyniny (górny panel), kreatyniny po 30 min inkubacji w 1-proc. roztworze TEA/D2O (środkowy panel) oraz kreatyniny po 60 min inkubacji w 1-proc. roztworze TEA/D2O...